促腎上腺皮質激素（ACTH）ELISA試劑盒準確性

發布時間： 2015/10/5　　點擊次數： 777次

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促腎上腺皮質激素（ACTH）ELISA試劑盒用于測定猴血清、血漿及相關液體樣本中促腎上腺皮質激素（ACTH）含量。

實驗原理
促腎上腺皮質激素（ACTH）ELISA試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中猴促腎上腺皮質激素（ACTH）水平。用純化的猴促腎上腺皮質激素（ACTH）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入促腎上腺皮質激素（ACTH），再與HRP標記的促腎上腺皮質激素（ACTH）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的促腎上腺皮質激素（ACTH）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中猴促腎上腺皮質激素（ACTH）濃度。

·準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值，大于等于0.9900。
·靈敏度：zui低檢測濃度小于10 pg/ml。
·特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
·重復性：板內、板間變異系數均小于15%。

促腎上腺皮質激素（ACTH）ELISA試劑盒操作步驟
1. 加樣：分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標準品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應120分鐘。
為保證實驗結果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl（取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內配制），37℃,60分鐘。
3. 溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
4. 每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液（同生物素標記抗體工作液） 100μl，37℃，60分鐘。
5. 溫育60分鐘后，棄去孔內液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。
7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應（此時藍色立轉）。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性，底物反應時間到后應盡快加入終止液。
8. 用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后15分鐘以內進行檢測。

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