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淺談peprotech細胞因子使用
發布時間： 2012-02-08 點擊次數： 2289次淺談peprotech細胞因子使用
peprotech細胞因子在使用中應該注意一些什么呢？peprotech細胞因子操作過程是怎么樣的呢？今天我們詳細講解下。peprotech細胞因子中不含載體蛋白(Carrier Protein)或其他添加劑(如A、HAS或蔗糖等)，并且通常以zui少量的鹽來進行凍干處理，因此微量的細胞因子在凍干過程中會沉積于管內，形成很薄或不可見的蛋白層。所以我們建議在收到產品后，務必在開蓋前先離心，使粘在管蓋或管壁...淺談peprotech細胞因子使用
peprotech細胞因子中不含載體蛋白(Carrier Protein)或其他添加劑(如A、HAS或蔗糖等)，并且通常以zui少量的鹽來進行凍干處理，因此微量的peprotech細胞因子在凍干過程中會沉積于管內，形成很薄或不可見的蛋白層。所以我們建議在收到產品后，務必在開蓋前先離心，使粘在管蓋或管壁上的蛋白聚集于管底(此時能否見到白色沉淀均屬正常現象)。1．離心：高速離心 (10, 000 rpm) 20-30 秒，或低速離心 (2, 000 rpm) 5 分鐘。
2．溶解(Recotitution)：用去離子水或其它緩沖液(根據說明書要求進行選擇)溶解至說明書要求的濃度 (一般為 0.1-1.0 mg/mL，如10ug的產品，需用10uL-100uL的去離子水或緩沖液溶解)。溶解時不可振蕩，避免因化學鍵的斷裂造成蛋白失活，可加入適當的溶劑輕搖并靜置一段時間，待細胞因子*溶解后使用。溶劑的選擇：
1)要求用去離子水溶解的產品，務必不可用鹽溶液，避免過高的鹽濃度造成蛋白不可逆的析出；
2) 要求用鹽溶液溶解的產品，請依照說明書上的濃度，同樣也是為了避免過高的鹽濃度。
3．分裝和貯存(Aliquot and Storage)：蛋白溶解后可根據自己的實驗需要進一步稀釋成工作液，稀釋可用RPMI 1640、DMEM或等溶液，其中含有5-10%的FCS (小牛或胎牛血清)或0.5 %的A(牛血清白蛋白)來穩定蛋白。工作液在4℃可保存1周，如需長期保存，則需分裝凍存于-20℃ (注意：不可凍存于-80℃)。分裝時每管中工作液的體積是一次實驗的用量，以實現每次實驗用完一只工作液，避免反復凍融引起蛋白活性的降低
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