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ELISA試劑盒檢測(cè)細(xì)胞因子知多少
發(fā)布時(shí)間： 2018-04-20 點(diǎn)擊次數(shù)： 1671次從21世紀(jì)初期，ELISA試劑盒由于免疫學(xué)研究中一個(gè)非?；钴S的領(lǐng)域就是細(xì)胞因子的研究，它的檢測(cè)成為現(xiàn)代生物科學(xué)研究的重要方面。國(guó)內(nèi)的生物廠家，運(yùn)用抗原、抗體反應(yīng)的原理已研制出了高靈敏度（sensitive）、高特異性、高度配套的細(xì)胞因子檢測(cè)試劑盒，生產(chǎn)的檢測(cè)試劑盒涵蓋幾乎所有的細(xì)胞因子。依據(jù)檢測(cè)方法不同，可分為ELISA測(cè)定（酶聯(lián)免疫）和放射免疫測(cè)定。
1. 放射免疫測(cè)定
放射免疫測(cè)定是將同位素分析的高靈敏度與抗原抗體反應(yīng)的特異性相結(jié)合，方法大多采用競(jìng)爭(zhēng)法原理。待檢的細(xì)胞因子與放射性同位素標(biāo)記的細(xì)胞因子競(jìng)爭(zhēng)與細(xì)胞因子抗體（多克隆抗體或單克隆抗體）結(jié)合，再通過(guò)分離劑分離結(jié)合狀態(tài)的標(biāo)記物，計(jì)數(shù)后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計(jì)算出細(xì)胞因子的量。本法具有靈敏度高（可檢測(cè)出ng甚至pg水平），特異性強(qiáng)、準(zhǔn)確性好等特點(diǎn)。
2.ELISA測(cè)定
2-1.
酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)（ELISPOT） 檢測(cè)試劑盒是基于定量夾心ELISA法原理，將刺激后的細(xì)胞滴加到包被在貼PVDF微孔中，放置于37℃孵育。在孵育的過(guò)程中，細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子即會(huì)被包被的抗體所捕獲，以下的過(guò)程與一般的ELISA實(shí)驗(yàn)相同，zui后用不溶性的酶聯(lián)底物進(jìn)行顯色，每一個(gè)顯色點(diǎn)（斑點(diǎn)）既代表一個(gè)分泌細(xì)胞因子的細(xì)胞。通過(guò)的ELISPOT分析儀或在顯微鏡下進(jìn)行計(jì)數(shù)，就可以進(jìn)行分析。ELISPOT法用于檢測(cè)單個(gè)細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，綜合了普通ELISA方法的高特異性和準(zhǔn)確定量的優(yōu)點(diǎn)，而且具有生物活性分析得出與功能相關(guān)的結(jié)果的優(yōu)點(diǎn)。
2-2.
ELISA試劑盒雙抗夾心ELISA法 雙抗體夾心法需制備針對(duì)細(xì)胞因子不同位點(diǎn)的兩個(gè)單克隆抗體，一個(gè)抗體作為固相抗體用于包被，另一個(gè)作為標(biāo)記抗體。可采用常規(guī)雙抗夾心法，也可采用一步法。由于血清中細(xì)胞因子的含量很低。常規(guī)ELISA法不能滿(mǎn)足要求，需引入生物素－親合素系統(tǒng)來(lái)提高靈敏度，即加入樣品后加入生物素標(biāo)記的另一個(gè)抗體，再加入親合素及生物素化的酶，再加入底物進(jìn)行顯色，顏色與待檢的細(xì)胞因子量呈正比。